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雞肺病毒(APV)實時熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書
【產品名稱】
商品名稱：雞肺病毒核酸檢測試劑盒（APV）核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
Name ：Diagnostic Kit for Avian Pneumo Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規格】48份/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測的肺組織、呼吸道分泌物、全血等標本中雞肺病毒核酸檢
測試劑盒 RNA，適用于雞肺病毒核酸檢測試劑盒感染的輔助診斷。其檢測結果僅供
參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對雞肺病毒核酸檢測試劑盒特異性引物，結合一條特異性熒光探
針，用一步法熒光 RT-PCR 技術對雞肺病毒核酸檢測試劑盒 RNA 進行體外擴增檢
測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
【標本采集】
病死或撲殺禽，取肺組織；待檢活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物，放于 1mL50%
甘油生理鹽水中；用注射器取血 5mL。
【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標
本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1樣本前處理
每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術剪剪碎混勻后取 0.05g 于
研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管
中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100uL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取
法），請按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準備區）
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性
對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑 APV 反應液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣（樣本處理區）
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl，分別加入相應的反
應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；熒光通道選擇：
檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿
選擇 ROX 參比熒光。
5.1結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲
線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。
5.2結果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數增長曲線；
可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
7. 質控標準
陰性質控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32；
以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
8. 產品性能指標
陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率
為 100％。
低檢測限：5.0×102copies/ml。
精密度：批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數（CV）均小于等于 3%。
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