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肉毒桿菌E型(BL-E)熒光PCR試劑盒【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，設(shè)計(jì)一對(duì)肉毒桿菌E型特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)肉毒桿菌E型的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)病原學(xué)輔助診斷。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次，有效期 12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。
說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
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1.1 結(jié)果判斷
陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，且曲線(xiàn)有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線(xiàn)。
可疑：檢測(cè)通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線(xiàn)的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線(xiàn)者為陽(yáng)性，否則為陰性。
陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值且無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線(xiàn)。
2. 檢測(cè)方法的局限性
a. 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
b. 樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；
c. 陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；
d. 病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
e. 不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
f. 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；
g. 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
3. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品：無(wú)明顯擴(kuò)增曲線(xiàn)或無(wú) Ct 值顯示；
陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線(xiàn)有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
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1.1 DNA 提取
1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液（固體標(biāo)本加入50μL 核酸提取液）， 100℃恒溫處理 10min，13,000 rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
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