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霍亂弧菌(O1)熒光定量PCR核酸檢測試劑盒【檢驗原理】
本試劑盒采用探針法實時熒光 PCR 技術，設計一對霍亂弧菌(O1)特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術對霍亂弧菌(O1)的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對病原學輔助診斷。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融少于 7 次，有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
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1.1 結果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。
可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)典型擴增曲線的樣本建議重復試驗，重復試驗結果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴增曲線者為陽性，否則為陰性。
陰性：樣本檢測結果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。
2. 檢測方法的局限性
a. 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
b. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結果；
c. 陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導致假陽性結果；
d. 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
e. 不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
f. 試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果；
g. 本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
3. 質控標準
陰性質控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
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1.1 DNA 提取
1) 對上述處理好的標本加入等體積核酸提取液（固體標本加入50μL 核酸提取液）， 100℃恒溫處理 10min，13,000 rpm 離心 5min，取上清液轉移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
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